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作者：张惠文1，黄永兰2，顾学范1 单位：1、上海交通大学医学院附属新华医院 上海市儿科医学研究所 内分泌遗传代谢病研究室，2、广州市妇女儿童医疗中心 干血纸片(dried blood spots, DBS)法是一种便捷的临床血液样本采集和运输技术，它既保证了待检测样品的生物稳定性又便于储存和运输，是罕见遗传代谢性疾病筛查和诊断的有效工具。DBS早在20世纪60年代就已被用于苯丙酮尿症的新生儿筛查[1]。近年来，随着自动化检验技术的发展，DBS在遗传代谢类疾病的诊断及筛查中的应用价值日渐突显[2]。戈谢病是一种罕见的常染色体隐性遗传代谢类疾病，临床表现为多脏器受累并呈进行性加重，并可危及生命。DBS技术的发展使戈谢病的筛查和诊断工作有了很大的进展，多个研究中心不断对方法进行优化，大大的提升了临床戈谢病筛查和诊断的准确性。目前，多个国家已经针对新生儿开展了大规模的戈谢病筛查工作，极大的改善了戈谢病的治疗情况。现综述DBS为载体进行的戈谢病筛查和诊断，为开展新生儿及高危戈谢病患者的筛查提供借鉴和参考。 一、戈谢病及其酶学检测样本 戈谢病是一种由于编码葡萄糖脑苷脂酶(Acid β–Glucocerebrosidase, GBA)的基因突变引起的常染色体隐性遗传病。基因突变造成体内该酶活性下降，从而导致其底物葡萄糖脂不能被正常降解而在溶酶体中贮积，在多种组织中形成典型的溶酶体贮积细胞即戈谢细胞，导致受累组织器官出现病变，出现脾肿大、血小板减少症等症状[3,4]。大量研究证实酶替代疗法可用于戈谢病治疗且取得了非常好的治疗效果[5,6]，而且及早诊断是提升这一疾病整体治疗效果的关键。 戈谢病的病因是GBA基因突变使得戈谢病细胞内GBA活性异常降低，因此临床上主要通过酶学检测，即测定血液细胞GBA活性并结合GBA基因突变检测来对戈谢病进行诊断，其中酶学检测是诊断戈谢病的金标准。葡萄糖脑苷脂酶主要存在于人体有核细胞内，临床上常采用患者新鲜的外周血白细胞或培养好的皮肤成纤维细胞作为检测样本。白细胞葡萄糖脑苷脂酶活性检测的实验室要求和运输要求较高，例如血液样本需做抗凝处理，低于25 ℃的常温运输，并且要求样本24 h内送达检测中心等。 因此，人们一直在研究探索其他有效且携带运输方便的检测样本。研究发现，与"外周血白细胞"或"培养细胞"采样相比，DBS标本采集、运输、储存更便捷，且检测结果可靠，适合在远离检测中心的地区开展戈谢病酶学检测，对戈谢病早期筛查诊断非常有效。干血斑采样方法简便易行，仅需将新鲜患者全血(50 μl左右)滴在滤纸上，获得直径约1 cm血斑，于室温放置4 h直至干燥，然后将滤纸置于密封塑料袋中保存即可。运输到检测实验室后，通过荧光反应法、串联质谱法等分析干血斑中待检测组分的信息来反映患者的诊断结果，如病毒DNA、代谢产物、酶活性等。国际上包括美国、意大利、澳大利亚在内的多个国家及地区都已经开展了DBS运载血液样本对GBA活力进行检测的研究[7,8,9,10]。 二、采用DBS为载体对戈谢病进行筛查和诊断 1．新生儿戈谢病筛查： 戈谢病是一类危害极大的遗传性疾病，可能在婴儿期就开始发病。为此，国际上一些国家已经将戈谢病列入到新生儿的筛查工作中(表1)。2011年，Han等[7]在韩国小规模运用DBS进行新生儿戈谢病筛查工作，确定了DBS用于新生儿筛查的可行性。2012年，Wittmann等[8]对匈牙利40 000例新生儿开展了戈谢病筛查。他们使用质谱(MS/MS)技术筛选出17例GBA活性异常低下的新生儿样本，然后进一步对这些样本进行GBA基因突变检测，发现了3例GBA二条等位基因突变的患儿以及7例杂合突变的携带者。同年，Mechtler等[9]对澳大利亚34 736例新生儿进行溶酶体贮积病筛查，对戈谢病使用ESI–MS筛查，发现了4例GBA活性异常的病例，通过基因突变检测确诊了两例戈谢病患儿。2014年，Liao等[10]对中国台湾103 314例新生儿进行了大规模的溶酶体贮积病筛查，发现了5例疑似病例，进一步通过GBA基因检测确诊了1例戈谢病患儿。  2．戈谢病高危人群筛查： 戈谢病在临床上罕见，临床表现与白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤、尼曼匹克病等疾病相似，导致其误诊率高。如患者出现不明原因的肝脾肿大、贫血、血小板减少、骨痛等临床表现时在排除白血病等血液系统癌症时，应当考虑戈谢病的可能。使用DBS对这些高危人群进行戈谢病筛查是提升这一类疾病检出率的有效方法。2013年有学者进行了一项多中心的观察性研究[11,12,13]，对血液科153例具有脾肿大和(或)血小板减少症的患者DBS样本进行GBA酶活性检测(入排标准见表2)，发现了19例GBA酶活性异常的样本，然后对这些患者的全血中GBA酶活性以及GBA基因突变进行重新筛查，确定了6例阳性戈谢病患者以及1例GBA杂合子。 |
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