志贺氏菌属检验的标准操作程序

　　【目的】

　　指导检验伤寒、副伤寒沙门氏菌。

　　【该SOP变动程序】

　　本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。

　　【标本的采集】

　　由受检者将采便用已蘸有甘油盐水的棉棒自行插入肛门内，轻轻转动，然后取出，插入带有编号的塑料试管中，交给检验科人员。

　　【检验程序】

　　采便→立即划线接种SS平板→培养后挑取可疑菌落接种三糖铁斜面及半固体培养基→生化学试验→血清学试验→报告检验结果。

　　【操作步骤】

　　1.分离培养

　　采便后立即用采便棒划线接种SS琼脂平板。36±1℃培养18-24小时，挑取无色半透明的光滑菌落分解乳糖或迟缓分解乳糖的光滑菌落，接种三糖铁斜面及半固体，36±1℃培养18-24小时。

　　2. 生化学试验

　　凡是三糖铁反应符合志贺氏菌属特征者（斜面产碱或不变色，底层产酸，H2S（—），产气（—），但福氏6型产生少量气体）、无动力、革兰氏阴性杆菌、作V-P试验，苯丙氨酸，赖氨酸，柠檬酸盐，葡萄糖铵试验。其结果全部阴性者，作血清学试验。

　　3. 血清学试验

　　挑取三糖铁斜面上的培养物，按下列顺序作玻片凝集试验：

　　四种志贺氏——→福氏————→宋内氏————→志贺氏————→志贺氏

　　多价血清       多价血清    血清      2型血清     1型血清

　　∣       + ∣        +∣        +∣          +∣

　　—∣         ↓         ↓         ↓       ↓

　　∣       福氏菌        宋内氏菌    志贺氏2型    志贺氏1型

　　↓       1-6型                某型+

　　鲍氏     7-11型       某组+：组内分型血清———→鲍氏某型

　　血清 ： 12-15型      全部—：加热破坏K抗原，重做凝集试验

　　      16-18型

　　福氏菌的鉴定：凡是与福氏多价血清凝集的菌株，可先用3、4，群6，群7，三种因子血清检查，根据群因子血清反应结果，再用型因子血清检查。福氏菌抗原成分如下

　　福氏志贺氏各菌型与五型抗原成份

　　（　）内的抗原可能不存在。

　　4.菌型的判定和结果的报告

　　根据生化学试验和血清学分型试验结果，判定菌型，报告结果。

　　【质量控制要求】

　　4.本程序所用的培养基及试剂依据中华人民共和国国家标准《食品卫生检验方法》微生物部分（GB4789-84）规定的方法配制的，或由省食品卫生监督检验所，省卫生防疫站推荐的合成培养基。

　　5.增菌及分离必须保证一个一支增菌管，一块平板，禁止多人一管，多人一块平板。

　　6.分离平板时平板一半以上应有孤立菌落，以供挑选。