伤寒、副伤寒沙门氏菌检验的标准操作程序

　　【目的】

　　指导检验伤寒、副伤寒沙门氏菌。

　　【该SOP变动程序】

　　本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。

　　【标本的采集】

　　由受检者将采便用已蘸有甘油盐水的棉棒自行插入肛门内，轻轻转动，然后取出，插入带有编号的塑料试管中，交给检验科人员。

　　【检验程序】

　　采便→分离培养→挑选菌落接种三糖铁斜面→生化试验→血清学试验→结果报告。

　　【操作步骤】

　　1. 分离培养

　　用棉棒直接划线接种SS平板，36±1℃培养18-24小时，观察菌落特征。伤寒及副伤寒沙门氏菌在SS平板上均呈无色半透明、光滑的中等菌落，菌落中心有黑心，但甲型副伤寒及部分伤寒沙门氏菌菌落无黑心。

　　平板上若有可疑菌落，挑选出来分别接种三糖铁斜面。将接种可疑菌的三糖铁斜面经36±1℃培养18-24小时后，观察反应情况。

　　2. 生化学试验

　　凡是三糖铁反应符合伤寒、副伤寒沙门氏菌特征者，作靛基质试验，尿素酶试验，KCN试验和赖氨酸脱酸酶试验。符合者做血清学试验。

　　伤寒、副伤寒沙门氏菌三糖铁反应结果

    伤寒、副伤寒沙门氏菌生化反应结果

　　3. 血清学试验

　　① 抗原准备

　　取三糖铁斜面培养物作为玻片凝集试验用的抗原。

　　② O抗原的鉴定

　　按下列顺序进行：

　　A-F————→0-2————→0-4————→0-7————→0-9

　　多价血清     血清      血清    血清      血清

　　∣        ↓       ↓      ↓        ↓

　　-∣        A群     B群     C群      G群

　　↓                 -

　　Vi————→菌悬液———————→0—9——→0—7血清

　　血清  100℃水浴20分钟        血清    +∣

　　+↓      ↓

　　可能为伤寒菌  可能为丙型副伤寒

　　③ H抗原的鉴定

　　根据O抗原出现的凝集情况，选用相应的H因子血清、检查第1相与第2相H抗原，如果第2相抗原不凝集，可用位相变异试验检查。

　　位相变异试验方法可采用简易平板法：将0.5-0.7％半固体琼脂平板烘干表面水份，取因子血清1环，滴在平板表面，待血清吸收到琼脂内，便在血清部位的中央点种待检菌株，培养后，在形成蔓延生长的菌苔边缘取菌检查。

　　伤寒、副伤寒沙门氏菌抗原构造

　　注：［ ］有的菌株有此抗原

　　4. 菌型的判定和结果报告

　　综合以上生化学试验和血清学分型鉴定的结果，判定菌型，报告结果。

　　【质量控制要求】

　　1. 本程序所用的培养基及试剂依据中华人民共和国国家标准《食品卫生检验方法》微生物部分（GB4789-84）规定的方法配制的，或由省食品卫生监督检验所，省卫生防疫站推荐的合成培养基。

　　2. 增菌及分离必须保证一个一支增菌管，一块平板，禁止多人一管，多人一块平板。

　　3. 分离平板时平板一半以上应有孤立菌落，以供挑选。