糖原染色（Schiff法）标准操作规程

　　1. 实验原理:过碘酸是氧化剂，使含有乙二醇基（－CHOH—CHOH）的多糖类物质（糖原粘多糖、粘蛋白、糖蛋白及糖脂等）氧化，形成双醛基（—CHO—CHO）。醛基与雪夫试剂中的无色品红结合，使无色的品红变成紫红色化合物，定位于含有多糖类的细胞内。

　　2. 标本采集

　　2.1 病人准备：了解病人是否对局麻药有过敏史。凝血因子严重缺陷引起的出血性疾病，穿刺部位有炎症或有畸形，晚期妊娠妇女作骨髓穿刺时要慎重。

　　2.2 标本种类：新鲜抽取的骨髓穿刺液

　　2.3 标本采集要求

　　2.3.1 高压消毒的穿刺针，一次性无菌手套和抽取骨髓液的无菌注射器。

　　2.3.2 临床上首选穿刺部位为髂后上棘；翻身困难，需多部位穿刺患者可选择髂前上棘为穿刺部位。小于3岁的小儿还可选择胫骨头内侧为穿刺部位。

　　3. 标本储存：滴加固定液盖满血膜5分钟，水洗待干室温避光保存。

　　4. 标本运输：室温运输

　　5. 标本拒收的标准：溶血、稀释标本不能作测定

　　6. 试剂

　　6.1 试剂名称：血细胞PAS染色测定

　　6.2 试剂生产厂家：上海太阳生物技术公司

　　6.3 试剂组成

　　试剂1：PAS固定液，10％甲醛甲醇溶液。2℃-8℃避光保存，有效期六个月。

　　试剂2：PASⅠ液，10g/L（1％）过碘酸溶液。2℃-8℃避光保存，有效期六个月。

　　试剂3：PASⅡ液，又称Schiff氏液。2℃-8℃避光保存，有效期六个月。

　　试剂4：苏木素复染液。2℃-8℃避光保存，有效期六个月。

　　7. 操作步骤

　　7.1 涂片滴加固定液5-8滴，盖满血膜即可，5分钟，水洗待干。

　　7.2 滴加Ⅰ液10分钟，水洗待干。

　　7.3 置入Ⅱ液内室温（20～25℃左右为宜）暗处放置30分钟，然后流水冲洗数分钟。

　　7.4 苏木素复染1～2分钟，水洗待干，镜检。

　　8. 结果判断

　　8.1 阳性结果—细胞内出现红色沉淀物，定位于胞质。

　　8.2 阴性结果—细胞内无红色沉淀物。

　　9. 临床意义

　　9.1 粒细胞系统自早幼粒阶段以下均可呈阳性，且随细胞分化而加强。

　　9.2 单核细胞系统可呈弥散状弱阳性伴细颗粒状。

　　9.3 淋巴系统可呈快状或粗颗粒状阳性。

　　9.4 巨核细胞系统（血小板）可呈粗块状或团块状阳性。

　　9.5 红细胞系统正常情况下呈阴性，当某些疾病时可呈阳性，如MDS，AML-M6时。

　　10. 操作性能：快速简便，特异性强，灵敏度高。

　　11. 方法局限性

　　11.1 标本应新鲜，且未受其他化学物品污染。

　　11.2 滴加Ⅰ液后水洗应充分，然后待涂片完全干燥后才能置入Ⅱ液内。

　　11.3 PASⅡ液保存不当或时间过久将会变红，并使阳性强度降低，且不能反复使用。

　　12. 参考文献

　　谭齐贤主编﹒临床血液学和血液检验﹒人民卫生出版社，2002，北京：50-51