异常红细胞涂片检查标准操作规程

　　1. 实验原理

　　用瑞氏染色法，对制备好的血涂片进行染色，然后在显微镜下进行形态检查。

　　2. 标本采集：

　　2.1 标本种类：新抽取的抗凝血或手指末梢血。

　　2.2 标本要求：

　　2.2.1 抗凝剂采用EDTA K2抗凝。

　　2.2.2 用手指末梢血作检验时，如手指有冻疮，则主张采用耳垂血。

　　3. 标本储存：取材后应立即推制成血涂片，并尽快送检。

　　4. 标本运输：保持干燥，室温运输。

　　5. 标本拒收标准：污染，凝固标本不能作测定。

　　6. 实验材料：

　　1.瑞氏染液（A液）

　　(1)瑞氏染料             0.1 g

　　(2)甲醇(AR)             60.0 ml

　　瑞氏染料由酸性染料伊红和碱性染料美蓝的氧化物(天青)组成。将瑞氏染料放入清洁干燥研钵里，先加少量甲醇，充分研磨使染料溶解，将己溶解的染料倒人棕色试剂瓶中，未溶解的再加少量甲醇研磨，直至染料完全溶解，甲醇全部用完为止。配好后放于事温下，一周后即可使用。新配染液效果较差，放置时间延长，染色效果越好。久置应密封，以免甲醇挥发或氧化成甲酸。染液中也可加中性甘油2-3ml，除可防止甲醇过早挥发外，也可使细胞着色清晰。

　　2. pH6.8磷酸盐缓冲液（B液）

　　磷酸二氢钾(KH2P04)         0.3g

　　磷酸氢二钠(Na2HP04)        0.2g

　　加少量蒸馏水溶解，再加至1000ml。

　　7. 实验仪器：

　　7.1 仪器名称： OLYMPUS 显微镜

　　7.2 仪器厂家：OLYMPUS

　　7.3 仪器型号：OLYMPUS CHK-F200A

　　8. 操作步骤

　　8.1  采血后推制厚薄适宜的的血膜片，血膜应呈舌状，头、体、尾清晰可分。

　　8.2  瑞氏染色：将制好的干燥血涂片平置于染色架上，滴加瑞氏染色液A液3-5滴使其迅速盖满血膜，然后加瑞氏染色B液3-5滴，轻轻摇动玻片或用洗耳球吹气使A、B染液充分混匀，染色1-2分钟（气温低或涂片较厚时可适当延长染色时间），用自来水冲去染液，待干。

　　8.3  高倍镜（必要时油镜）观察红细胞形态。

　　9. 结果判断与分析：

　　在良好的染色血涂片上，正常红细胞的大小形态较为一致，直径为6.7～7.7μm，染色淡红色，中央着色较边缘淡。各种病因作用于红细胞生理进程的不同阶段引起相应的病理变化，导致某些类型贫血的红细胞产生特殊的形态变化，可从染色血涂片上红细胞的大小、形态、染色等方面反映出来。此种形态学改变与血红蛋白测定、红细胞计数结果相结合可粗略地推断贫血原因，对贫血的诊断和鉴别诊断有很重要的临床意义。红细胞的形态变化主要表现在以下四个方面：

　　（一）红细胞大小改变

　　1. 小红细胞（microcyte）直径小于6μm者称为小红细胞，正常人遇见。如果血涂片中出现较多染色过浅的小红细胞，提示血红蛋白合成障碍，可能由于缺铁引起；或者是珠蛋白代谢异常引起的血红蛋白病。而遗传性球形细胞增多症的小红细胞，其血红蛋白充盈良好，生理性中心浅染区消失。

　　2. 大红细胞（macrocyte）直径大于10μm。见于溶血性贫血及巨幼细胞贫血。

　　3. 巨红细胞（megalocyte）直径大于15μm。最常见于缺乏叶酸及维生素B12所致的巨幼细胞性贫血。其胞体所以增大是因为缺乏上述因子时，幼稚红细胞内DNA合成不足，不能按时分裂所致。如果血涂片中同时存在分叶过多的中性粒细胞则巨幼细胞性贫血可能性更大。

　　4. 红细胞大小不均（anisocytosis）是指红细胞之间直径相差一倍以上而言。常见于严重的增生性贫血血涂片中。而巨幼细胞性贫血时尤为明显，可能与骨髓粗制滥造红细胞有关。

　　（二）红细胞形态改变

　　1. 球形红细胞（spherocyte）细胞直径小于正常。厚度增加常大于2μm。无中心浅染色区，似球形。常见于遗传性球形细胞增多症和伴有球形细胞增多的其它溶血性贫血。如自身免疫性溶血性贫血、新生儿溶血病以及红细胞酶缺陷所致溶血性贫血等。

　　2. 椭圆形红细胞（elliptocyte）细胞呈卵圆形、杆形、长度可大于宽度3-4倍，最大直径可达12.5μm，横径可为2.5μm。此种红细胞置于高渗、等渗、低渗溶液或正常人血清内，其椭圆形保持不变，但幼红细胞及网织红细胞均不呈椭圆形。在遗传性椭圆形细胞增多症病有血涂片中此种红细胞可达25%，甚至高达75%（正常人约占1%）。

　　3. 靶形红细胞（target cell）红细胞中心部位染色较深，其外围为苍白区域，而细胞边缘又深染，形如射击之靶。有的中心深染区不像孤岛而像从红细胞边缘延伸的半岛状态或柄状，