中和试验检测低水平HbsAg的意义

我国广泛用酶免疫法(ELISA)检测HBV血清标志物，但ELISA法存在“灰区”，低水平的检测值无法避免假阳性、假阴性。近年来微粒子酶免法(MEIA)和化学发光法(CLIA)等灵敏度高的自动化检测方法逐步应用，检测下限越来越低，低水平HBsAg检测率逐步增加，但是自动化检测成本昂贵，不易作为常规应用。中和试验因灵敏度和特异性都很高，在病毒学检测中往往作为确认试验。本文用中和试验对低水平HBsAg进行检测，初步探讨其临床意义。

1.对象与方法

1.1 研究对象

本院经ELISA试剂盒检测HBsAg为弱阳性(1≤S/CO≤5)血清样本35例，经CLIA检测HBsAg为弱阳性(0.05IU/mL≤报告值≤2.00 IU/mL)的血清样本10例.

1.2 检测方法

(1)ELISA检测HBsAg采用上海科华公司试剂盒，CLIA检测HBsAg采用雅培ARCHITECT i2000SR免疫发光分析仪及配套试剂。

(2)ELISA中和试验方法：采用珠海丽珠公司HBsAg中和试剂盒检测。试验原理[1]：在用抗-HBs抗体包被的微孔中分别加入含抗-HBs抗体的试剂和待测血清，试剂中的特异性抗-HBs抗体与固相抗-HBs竞争结合血清中的HBsAg，从而使结合到固相上并与酶标抗-HBs结合形成夹心复合物的HBsAg量减少，最后显色反应较浅，计算抑制率并与对照孔比较，可以判断血清中是否存在HBsAg。

2.结果

2.1 ELISA法中和试验结果

ELISA检测为弱阳性的35例样本，经中和试验确认有8例阴性，27例阳性。

2.2 经CLIA检测为弱阳性的10例样本，中和试验确认有4例阳性。

2.3 中和试验抑制率与肝功能、HBV-DNA的关系45例低水平HBsAg样本经的肝功能及HBV-DNA结果，抑制率值越大，肝功能异常率越高，HBV-DNA阳性率也越高。
                                    
3.讨论

本次试验的45例低水平HBsAg血清样本中，ELISA法确认试验确认为HBsAg阳性31例、阴性14例，而化学发光法检测45例样本均为阳性。可见ELISA与化学发光法检测低水平HBsAg结果存在不一致性。ELISA检测HBsAg影响因素较多，温育温度、时间及方式对ELISA测定结果均有影响，因此，低水平的HBsAg筛查值的确认极其重要。《全国临床检验操作规程》建议必要时应采用中和试验进行确认，特别是弱阳性的检测结果需进一步确认。

虽然低浓度的HBsAg的患者占乙肝病毒感染者的比例很低，但在临床实践中，低浓度的HBsAg样本(低于国产试剂的检测下限)也经常能被发现， 血清HBsAg呈低浓度存在可能有多种原因，但主要原因是大多数HBV感染患者随着年龄增长，HBV逐渐清除，HBsAg逐渐下降，并可能伴有血清学转换，出现抗-HBs等。“弱反应性”检测结果的确认应使用特异性高的方法，比如中和试验，作为确认试验可减少错误检查结果的误导。

有研究表明，HBsAg阳性特别是低水平阳性并不能确诊为HBV感染。由于HBsAg是HBV的外衣壳，可单独存在于血液中，特别是近期注射过乙肝疫苗的患，单凭HBsAg阳性并不能说明受检者体内存在HBV。如果单纯提高HBsAg检测灵敏度，那么HBsAg阳性检出率也会增高，也就造成假阳性结果增多，对临床诊断并无意义，反而给受检者增加精神负担和压力。低水平HBsAg的临床价值有待进一步探讨。