作者：复旦大学附属眼耳鼻喉科医院检验科 汤荔, 冯忠盈, 曹文俊, 石毅, 邵明希, 陈惠雯
为了标准化出血与血栓性疾病检测,特别是解决手术前有关患者出血倾向筛查问题,卫生部颁发了(2000)412号文件,停止使用一般外科手术前的常规出血时间检测,用活化部分凝血活酶时间(APTT)、血浆凝血酶原时间(PT)等凝血试验代替[ 1]。凝血试验检测结果准确性与分析前过程密切相关,尤其与标本采集后的放置时间和温度等因素有关。我们主要探讨凝血试验标本在室温下存放的时间长短对于凝血试验的结果是否有一定的影响。
材料和方法
一、材料
1.标本 选择2008年8月至9月于复旦大学附属眼耳鼻喉科医院门诊就诊的患者。根据上述标准,通过筛选和评估,总计110例受试者入选此项研究,其中100例完成试验(10例因仪器故障等原因未能完成试验)。每例标本分别进行APTT、PT、凝血酶时间(TT)及纤维蛋白原(Fbg)含量检测。根据不同的检测项目和放置时间的长短分组后进行配对结果分析。
2.仪器和试剂 (1)仪器设备:Sysmex CA-6000全自动血凝仪;Megafuge 1.0离心机;武汉致远医疗科技有限公司枸橼酸钠抗凝真空负压管;(2)相关试剂:Dade Behring公司;(3)质量控制品:Dade Ci-Trol level 1;Dade Ci-Trol level 2。
二、方法
1.采样 入选标准为采用门诊早晨第1批采血的10个标本,我科采用计算机LIS系统,在采集标本的同时扫描条形码,条形码会记录下该标本患者的基本信息,如姓名、年龄、性别等,同时记录下采集标本的具体时间[ 2]。规定时间为早上7∶30~8∶30,并且要求作为试验对象的10个标本必须集中在30 min内采集。采用109 mmol/L枸橼酸钠与静脉血样1∶9比例抗凝的抗凝血标本 3 mL用于实验;排除标准为排除超出规定时间的标本;排除不在同一时间段的标本(必须同是30 min内采集);排除抗凝比例不准确的标本;排除采血不顺利或标本中有凝集块的标本;排除有脂血、溶血的标本。
2.标本处理 本研究根据实验入选标准每日选取10个标本,及时进行离心,3 000 r /min(离心半径为15.5 cm)离心10 min,将处理后的标本在采集1 h内进行检测。检测项目为凝血实验4项,包括APTT、PT、TT及Fbg含量测定,记录数据。将检测完的标本放置在室温22~26 ℃下,在距离标本采集时间2h±10 s再次进行检测,检测项目为上述4项凝血试验,记录数据。依次类推,分别在距离标本采集1 h内、2、4、6、8、10 h进行上述4项凝血试验检测,记录结果。
三、统计学方法
将记录的数据根据不同的检测项目(PT、APTT、TT、Fbg)进行归类。将不同项目在2、4、6、8、10 h检测结果与标本采集1 h内的结果进行配对比较,使用SAS统计软件包进行配对 t检验,作相关的统计学分析。
结果
一、APTT检测结果
APTT 1 h内检测结果与2、4、6、8、10 h检测结果差异有统计学意义( P<0.01),2 h检测结果比1 h内检测结果平均延长了1.22%,4 h检测结果比1 h内检测结果平均延长了5.63%,6 h检测结果比1 h内检测结果平均延长了9.44%,8 h检测结果比1 h内检测结果平均延长了14.1%,10 h检测结果比1 h内检测结果平均延长了26.5%。APTT检测结果随标本室温存放时间的延长而显著延长。见 表1及 图1~3。
为了标准化出血与血栓性疾病检测,特别是解决手术前有关患者出血倾向筛查问题,卫生部颁发了(2000)412号文件,停止使用一般外科手术前的常规出血时间检测,用活化部分凝血活酶时间(APTT)、血浆凝血酶原时间(PT)等凝血试验代替[ 1]。凝血试验检测结果准确性与分析前过程密切相关,尤其与标本采集后的放置时间和温度等因素有关。我们主要探讨凝血试验标本在室温下存放的时间长短对于凝血试验的结果是否有一定的影响。
材料和方法
一、材料
1.标本 选择2008年8月至9月于复旦大学附属眼耳鼻喉科医院门诊就诊的患者。根据上述标准,通过筛选和评估,总计110例受试者入选此项研究,其中100例完成试验(10例因仪器故障等原因未能完成试验)。每例标本分别进行APTT、PT、凝血酶时间(TT)及纤维蛋白原(Fbg)含量检测。根据不同的检测项目和放置时间的长短分组后进行配对结果分析。
2.仪器和试剂 (1)仪器设备:Sysmex CA-6000全自动血凝仪;Megafuge 1.0离心机;武汉致远医疗科技有限公司枸橼酸钠抗凝真空负压管;(2)相关试剂:Dade Behring公司;(3)质量控制品:Dade Ci-Trol level 1;Dade Ci-Trol level 2。
二、方法
1.采样 入选标准为采用门诊早晨第1批采血的10个标本,我科采用计算机LIS系统,在采集标本的同时扫描条形码,条形码会记录下该标本患者的基本信息,如姓名、年龄、性别等,同时记录下采集标本的具体时间[ 2]。规定时间为早上7∶30~8∶30,并且要求作为试验对象的10个标本必须集中在30 min内采集。采用109 mmol/L枸橼酸钠与静脉血样1∶9比例抗凝的抗凝血标本 3 mL用于实验;排除标准为排除超出规定时间的标本;排除不在同一时间段的标本(必须同是30 min内采集);排除抗凝比例不准确的标本;排除采血不顺利或标本中有凝集块的标本;排除有脂血、溶血的标本。
2.标本处理 本研究根据实验入选标准每日选取10个标本,及时进行离心,3 000 r /min(离心半径为15.5 cm)离心10 min,将处理后的标本在采集1 h内进行检测。检测项目为凝血实验4项,包括APTT、PT、TT及Fbg含量测定,记录数据。将检测完的标本放置在室温22~26 ℃下,在距离标本采集时间2h±10 s再次进行检测,检测项目为上述4项凝血试验,记录数据。依次类推,分别在距离标本采集1 h内、2、4、6、8、10 h进行上述4项凝血试验检测,记录结果。
三、统计学方法
将记录的数据根据不同的检测项目(PT、APTT、TT、Fbg)进行归类。将不同项目在2、4、6、8、10 h检测结果与标本采集1 h内的结果进行配对比较,使用SAS统计软件包进行配对 t检验,作相关的统计学分析。
结果
一、APTT检测结果
APTT 1 h内检测结果与2、4、6、8、10 h检测结果差异有统计学意义( P<0.01),2 h检测结果比1 h内检测结果平均延长了1.22%,4 h检测结果比1 h内检测结果平均延长了5.63%,6 h检测结果比1 h内检测结果平均延长了9.44%,8 h检测结果比1 h内检测结果平均延长了14.1%,10 h检测结果比1 h内检测结果平均延长了26.5%。APTT检测结果随标本室温存放时间的延长而显著延长。见 表1及 图1~3。
图1 APTT标本放置1 h与2 h检测结果的比较
图2 APTT标本放置1 h与10 h检测结果的比较
图2 APTT标本放置1 h与10 h检测结果的比较
图3 APTT室温存放结果随时间变化趋势图
二、PT、TT及Fbg检测结果
PT 1 h内检测结果与2、4 h检测结果差异无统计学意义( P>0.05);PT 1 h内检测结果与6、8、10 h检测结果差异有统计学意义( P<0.01);PT检测结果随存放时间的延长而延长。
TT 1 h内检测结果与2、4 h检测结果差异无统计学意义( P>0.05);TT 1 h内检测结果与6、8、10 h检测结果差异有统计学意义( P<0.01);TT结果逐渐随保存时间的延长而延长。
Fbg 1 h内检测结果与2 h检测结果差异无统计学意义 ( P>0.05);Fbg 1 h内检测结果与4、6、8、10 h检测结果差异有统计学意义( P<0.01)。
上述3项试验使用SAS统计系统进行配对 t检验,结果见 表2。
PT 1 h内检测结果与2、4 h检测结果差异无统计学意义( P>0.05);PT 1 h内检测结果与6、8、10 h检测结果差异有统计学意义( P<0.01);PT检测结果随存放时间的延长而延长。
TT 1 h内检测结果与2、4 h检测结果差异无统计学意义( P>0.05);TT 1 h内检测结果与6、8、10 h检测结果差异有统计学意义( P<0.01);TT结果逐渐随保存时间的延长而延长。
Fbg 1 h内检测结果与2 h检测结果差异无统计学意义 ( P>0.05);Fbg 1 h内检测结果与4、6、8、10 h检测结果差异有统计学意义( P<0.01)。
上述3项试验使用SAS统计系统进行配对 t检验,结果见 表2。
讨论
我们在临床检测中使用LIS计算机系统,可以准确的掌握标本的采集和检测时间,并可提供患者的详细信息,为本实验提供了可靠的时间背景数据。
从实验可以看出,PT、APTT、TT、Fbg的结果在室温下随着存放时间的延长而增高,尤其以APTT的结果变化最为显著。APTT主要用于检测内源性的凝血因子缺乏,尤其对于因子Ⅷ缺乏的轻型血友病敏感,在实验中标本采集2 h的检测结果已经比1 h内检测结果延长,而随着在室温下存放时间的延长,结果的差异更加明显。从实验结果看,对于一般正常患者标本,APTT的结果虽然在室温存放下显著延长,但没有达到有临床诊断价值的阶段(APTT检测结果较正常对照值延长10 s以上有诊断价值),但对于一些结果处于临界范围(35~40 s)的标本或处于血栓前状态患者标本(APTT结果较正常对照值缩短),如果不能及时检测,结果会干扰临床的诊断。曾经有报道在32 ℃保存血浆6、12、24 h,Ⅷ因子活性可分别消失50%、60%、95%,即使保存在4 ℃也分别消失5%、55%、70%。V因子活性在32 ℃分别消失25%、40%、80%[ 3]。因此为保证结果的准确性,APTT最好是标本采集后1 h内检测,如果无法做到,也建议尽可能在2 h内完成检测。
PT主要用于检测外源性的凝血因子缺乏,本科室PT正常参考范围定为10.0~14.5 s,检测结果较正常对照值延长3 s以上对临床诊断有价值。在实验中可以看到,PT实验在标本采集后4 h内检测的结果之间差异无统计学意义,但到了6 h结果就有明显的差异,随着在室温下放置时间的延长,PT检测结果逐步上升。但即使是在室温下存放达到10 h,PT的结果延长不超过1.5 s。正常标本在室温下放置10 h后,虽然结果与1 h内有显著差异,但并没有影响其临床诊断。对于结果已经处于14.5~17.0 s范围内的标本,室温下存放时间的延长导致的PT结果延长会影响临床诊断。因此进行血浆PT检测建议在4 h之内完成。
TT测定主要反映凝血共同途径中生成的凝血酶使纤维蛋白原转变为纤维蛋白的时间,纤维蛋白(原)降解产物(FDP)能使之延长,本科室TT正常参考范围定为14~21 s,检测结果较正常对照值延长3 s以上对临床诊断有价值。在实验中TT在4 h内检测结果之间差异无统计学意义,之后随标本在室温的存放时间延长,结果之间出现差异。但即使是在室温下存放达到10 h,TT的结果延长不超过3 s。正常标本在室温下放置10 h后,虽然结果与1 h内有显著差异,但并没有影响其临床诊断。对于结果已经处于临界范围内的标本,室温下存放时间的延长导致的TT结果延长会影响临床诊断。因此TT检测建议在4 h内完成。
Fbg检测主要是测定血浆中的纤维蛋白原含量,本科室Fbg正常参考范围定为2~4 g/L,低于2 g/L可能为低纤维蛋白原血症,高于4 g/L可能为血栓前状态。本实验结果显示,Fbg含量在1 h内检测和2 h检测结果差异无统计学意义,1 h内检测结果与4、6、8和10 h之间差异有统计学意义,随放置时间的延长,Fbg结果上升。这一结果与Lamboo等[ 4]提出Fbg检测结果6 h内相对稳定不符,其原因可能为:(1)在室温下室内的湿度较低,暴露在空气中血浆水分蒸发、浓缩使Fbg含量上升;(2)未将标本中的血浆单独分离保存,红细胞中某些物质随室温下存放时间延长而释放入血浆,影响血浆凝固时间。根据本实验结果,Fbg检测建议在2 h内完成。
PT和TT检测结果在4 h内是稳定的,所以PT和TT的检测应在标本采集后4 h内完成。Fbg检测结果在2 h内结果是稳定的,Fbg的检测应在标本采集后2 h内完成。APTT 2 h检测结果与1 h内检测结果差异有统计学意义,因此应在标本采集后尽快检测,如果无法做到立即检测,标本应在采集后2 h内完成实验。这样能使APTT检测结果与其真实值之间的差异保持在最小的范围。综上所述,4项凝血指标的检测如有条件应在标本采集后1 h内完成检测,若无法完成,在室温条件下必须在2 h内完成检测或分离血浆后按不同检测要求低温保存。对于异常结果(超出正常对照值上限或下限,影响临床诊断的结果),应考虑重新抽血复查并询问患者病史。
参考文献
[1] 丛玉隆. 关于卫生部出凝血时间操作规程《通知》的理解[J]. 中华检验医学杂志, 2001, 24(3): 183-185.
[2] 冯忠盈, 王朱健. 条码技术在检验科的应用[J]. 生物医学工程与临床, 2006, 10(1): 47-49.
[3] 徐杰伟, 蔡早育, 李小平, 等. 标本放置时间及温度对凝血指标测定结果的影响[J]. 临床和实验医学杂志, 2004, 3(2): 76-78.
[4] Lamboo M, Pol DC, Eikenboom JC, et al. Coagu-lation parameters of thawed fresh-frozen plasma during storage at different temperatures[J]. Transfus Med, 2007, 17(3): 182-186.
