我国为肝炎高发地区, 其中以病毒性肝炎最为常见, 急性病毒感染后可进展为慢性。慢性病毒性肝炎中则以慢性乙型肝炎和丙型肝炎为主, 其产生及发展可能涉及到患者自身抗原出现的免疫应答及其产生的多种自身抗体。研究显示嗜肝病毒感染机体与相关药物治疗均可能会诱发患者自身免疫[1], 造成肝细胞免疫损伤与炎症性坏死, 长期的自身免疫现象则可能会诱发肝细胞恶变 [2]。近年来, 病毒性肝炎的自身免疫现象引发了诸多研究者的关注, 肝炎病毒性感染者血清存在的自身抗体主要包括抗线粒体抗体(anti-mitochondrial antibody, AMA)、抗线粒体抗体2型IgG(AMA-M2)、抗平滑肌抗体(anti-smooth muscle antibody, SMA)、抗肝细胞胞质抗原1型抗体(anti-liver cytosol type 1 antibody, LC-1)、抗肝肾微粒抗体(anti-liver/kidney microsomal, LKM)、抗可溶性肝抗原/肝胰抗原抗体(anti-soluble liver antigen/live pancreatic antigen, SLA/LP)、抗核抗体(anti-nuclear antibody, ANA)等。为了解本地区病毒性肝炎患者自身抗体的存在状况, 我们对370例病毒性肝炎患者的自身抗体进行了分析。
材料和方法
一、对象
选取2011年1月至2014年12月在池州市人民医院就诊的病毒性肝炎患者370例, 其中男214例、女156例, 年龄5~80岁, 包括甲型肝炎56例、乙型肝炎157例、丙型肝炎115例、丁型肝炎23例、戊型肝炎19例, 全部病例均按《病毒性肝炎防治方案》[3]确诊, 排除其它自身免疫性疾病。
二、仪器和试剂
奥林帕斯荧光显微镜、欧蒙免疫印迹仪。AMA、AMA-M2、SMA、LC-1、LKM、SLA/LP、ANA检测试剂盒均由北京和杰创新生物医学科技有限公司提供。
三、方法
采用免疫荧光法检测AMA、SMA、ANA。选择HEp2与猴肝脏冰冻切片作为抗原生物薄片, 待测血清均自1:100开始稀释, 与基质温育、洗涤后, 再与异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate, FITC)标记的羊抗人IgG继续温育, 洗涤, 甘油封片, 于荧光显微镜下观察, 根据特异性荧光图形判断所得结果, 若组织或细胞中出现明显特异性绿色荧光则判定为阳性。采用蛋白印迹法检测AMA-M2、LC-1、LKM、SLA/LP。
三、统计学分析
采用SPSS19.0软件进行统计分析。所有计数资料以频数(f)表示, 无序分类资料比较采用χ 2检验。以P< 0.05为差异有统计学意义。
结果
病毒性肝炎患者AMA总阳性率为7.03%、AMA-M2总阳性率为3.78%、SMA总阳性率为0.81%、LC-1总阳性率为0.54%、LKM总阳性率为1.89%、sLA/LP总阳性率为0%、ANA总阳性率为18.38%。5种病毒性肝炎中以丙型肝炎患者自身抗体阳性率最高, 为62.61%, 且以ANA阳性为主(33.91%); 乙型肝炎次之, 为26.75%, 也以ANA阳性为主(15.29%); 明显高于其它3种病毒性肝炎。见表1。
讨论
我国是病毒性肝炎的高发地区, 其发病机制一直是医学界研究的热点, 而近年来研究发现, 除了自身免疫性肝病, 病毒性肝炎患者也存在自身免疫现象, 血清中可检测出各种自身免疫抗体[4, 5, 6]。尽管自身免疫是人体正常的生理现象, 但过度反应就会引发自身免疫性疾病。KAMMER等[7]认为病毒感染是自身免疫性疾病的启动因子, 靶细胞内抗原成分改变或因病毒蛋白正常组织间存在同源性故可诱发机体自身免疫。研究显示慢性肝病患者中约有1/3的患者血清中能检测出自身抗体, 其中以AMA、SMA、ANA为主[8]。丙型肝炎病毒(hepatitis C virus, HCV)感染后可引发自身免疫性肝炎[9], 而HBV感染患者中可能检测到ANA[10]。肝炎病毒感染后发生的多种自身抗体是病毒性肝炎病程进展中的特征性表现, 可触发自身免疫反应, 同时感染发生后可经多种途径对机体免疫系统形成损伤, 导致机体免疫耐受性受到破坏, 加重肝脏损伤。病毒性肝炎患者自身抗体的检测不仅对疾病的认知有重要意义, 对其治疗也存在一定的指导意义。
本研究结果显示370例病毒性肝炎患者中除SLA/LP外, AMA、AMA-M2、SMA、LC-1、LKM、ANA均有检测到。其中, ANA阳性率最高, 占18.38%, 其次为AMA和AMA-M2。在病毒性肝炎种类中则以丙型肝炎自身抗体检出率最高, 乙型肝炎次之。丙型肝炎之所以存在较明显的自身免疫现象, 是因为HCV感染可经分子模拟现象激活自身免疫反应性CD8+T细胞, 进而引发自身免疫。此外, HCV更易引发宿主自身免疫反应, 也可能与HCV和肝细胞膜靶抗原存在相同抗原决定簇有关[11]。但这一结果与自身免疫性肝病患者相比要低得多[12]。可见, 自身抗体主要发生于自身免疫性肝病中, 而在少数病毒性肝炎患者, 尤其是乙型肝炎和丙型肝炎患者中也可能会发生自身免疫反应, 或合并自身免疫性肝病, 故临床应引起重视。此外, 本研究中自身抗体阳性检出率与以往报道[2, 5]相比存在差异, 其原因可能与自身抗体检测方法及试剂差异有关, 也可能与检测群体的差异有关。
目前, 有关慢性病毒性肝炎诱发自身免疫尚需做进一步研究, 如病毒性肝炎伴自身免疫现象还是自身免疫性肝炎, 对于这部分患者的诊断鉴别仍十分棘手。对于病毒性肝炎伴有自身免疫现象者, 一般认为其并不直接对免疫系统功能产生影响, 但高滴度自身抗体则与自身免疫疾病关系密切。对存在自身免疫现象的病毒性肝炎患者来说, 在进行干扰素抗病毒治疗之前一定要先排除自身免疫性肝炎, 因干扰素多会加重或诱发自身免疫现象。而激素类治疗自身免疫性肝炎时, 对合并病毒性肝炎患者则会导致病毒复制增强。故在病毒性肝炎合并自身免疫性肝炎患者的治疗过程中, 治疗方案的选择应十分慎重[13]。
综上所述, 病毒性肝炎患者中确实存在自身免疫现象, 又以ANA及AMA阳性最为多见。故对病毒性肝炎患者进行自身抗体检测有助于了解患者机体免疫状况, 对于指导临床合理用药意义重大。
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