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基于磁珠的可视化蛋白质芯片检测ABO血型

2017-3-9 23:18| 发布者: 金光| 查看: 54| 评论: 0

摘要: 目前临床常规血型检测方法都是基于红细胞的凝集反应来判断血型,因而会受到如冷凝集等非特异性凝集反应的影响。也有研究利用基因芯片和基于荧光的蛋白质微阵列来进行血型判定,一定程度上可以规避血清学方法的弊端, ...

       目前临床常规血型检测方法都是基于红细胞的凝集反应来判断血型,因而会受到如冷凝集等非特异性凝集反应的影响。也有研究利用基因芯片和基于荧光的蛋白质微阵列来进行血型判定,一定程度上可以规避血清学方法的弊端,但是操作繁琐、耗时,并且依赖于昂贵的专业仪器。

       第三军医大学第一附属医院赵树铭副教授领衔的一项最新研究,将磁珠与蛋白微阵列相结合,结果可通过显微镜甚至肉眼观察,也可经过CCD成像,为进一步构建高通量、自动化、操作简单、价格适宜的血型及血液相关疾病一体化检测方法打好基础。研究结果发表在《检验医学与临床》2014年5月第11卷第10期。

       试验选择人免疫球蛋白G(IgG)及磁珠标记的抗人IgG进行琼脂糖浓度、点样浓度、温度和固定时间等实验条件的摸索。根据优化的条件,经过铺片、点样、固定、封闭等程序构建ABO血型检测蛋白质微阵列,加入血液样品进行反应,最后用磁珠标记的抗体进行检测(图1)。

       通过条件的优化发现,在1.0%的琼脂糖基片表面(图2),以100 μg/mL 的蛋白质稀释液点样(图3),之后在24°C固定8h(图4),能够得到更优的信号强度。

       检测不同稀释度的抗原抗体,正定型效价可达到1:8192,反定型可达到1:4096(图5)。检测14例临床样品,结果样点清晰、肉眼可见(图6),且结果判定与试管法一致性达100%。

       该研究成功构建了基于磁珠的血型检测可视化蛋白质微阵列。与传统的玻片法和试管法相比,运用芯片技术进行血型判定具有灵敏度高、标本和试剂用量少、高通量且易于自动化的特点。今后的研究可使用专业设备进行微阵列构建和制作工艺方面的优化,相信可以使芯片在灵敏度和样点均一性方面得到提高,为进一步构建血型及血液相关疾病一体化检测方法打好基础。

                                                                                                                编辑:范伟伟


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