新乡市第一人民医院检验科 路爱丽，齐振普，张敏
摘要：目的 探讨联合应用胶体金免疫层析法（免疫法）与匹拉米洞半定量法（化学法）胃液潜血试验对胃出血的诊断价值。方法 首先将免疫法与化学法进行比对评价，然后分别用免疫法和化学法检测３０例确诊胃出血患者（病例组）与４５例无胃出血的患者（对照组）胃液标本。比较２种方法的敏感性、特异性、检测范围，用Ｐｅａｒｓｏｎχ2检验进行方法间比较。结果 免疫法的血红蛋白（Ｈｂ）敏感性（检出限）为０．０５μｇ／ｍＬ，化学法Ｈｂ的敏感性为１０μｇ／ｍＬ，二者相差２００倍。Ｈｂ含量在０．０５～２０００μｇ／ｍＬ之间免疫法均可检出，但标本检测液中的Ｈｂ＞２０００μｇ／ｍＬ时，可能出现竞争抑制而呈假阴性。化学法只能检出Ｈｂ含量在１０μｇ／ｍＬ以上的标本。免疫法与化学法检测结果差异有统计学意义（χ２＝１１４．４６６，Ｐ＝０．０００）。免疫法只与Ｈｂ反应，化学法则受食入动物肉类、铁剂等影响产生假阳性。胃液可消化Ｈｂ，使其失去免疫原性而出现假阴性。在２ｍＬ胃液中加入１００μＬ患者血液（Ｈｂ１４２ｇ／Ｌ），３７℃反应１ｈ，免疫法即会出现假阴性。化学法反应至８ｈ，结果仍呈强阳性（＋＋＋＋）。结论 免疫法敏感性高、特异性强、检测范围宽，但出血量大，Ｈｂ＞２０００μｇ／ｍＬ时，可出现竞争抑制而致假阴性，也可因胃液的消化作用导致假阴性。化学法的敏感性和特异性较差，但不会出现竞争抑制和因Ｈｂ被消化分解而致的假阴性，２种方法联合应用，可起到优势互补的作用。
关键词：胃液潜血；胶体金免疫层析法；匹拉米洞半定量法
目前潜血试验多针对检测标本内由于少量出血而存在红细胞破坏释放的血红蛋白（ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ，Ｈｂ）。潜血检测方法有免疫法（胶体金免疫层析法等）和化学法（匹拉米洞定量法等），２种方法相比，免疫法敏感性、特异性都有很大提高，不受饮食或相关药物影响，已被广泛应用于临床和批量人群的查体。实际应用中，常发现胃出血者免疫法与化学法结果不一致，免疫法出现阴性结果。我们为验证方法的可靠性，对胶体金免疫层析法（免疫法）和匹拉米洞定量法（化学法）进行比较。
材料和方法
一、研究对象
胃出血组为胃镜检查确诊为胃出血患者３０例，对照组为随机抽取胃镜检查确诊为无胃出血的消化科门诊患者４５例。空腹１２ｈ，在胃镜检查过程中收集胃液约５０ｍＬ。胃镜检查和胃液检验均征得患者同意，本研究也得到医院伦理委员会的认可。
二、试剂
免疫法潜血试带由上海凯创生物技术有限公司提供。化学法试带由珠海贝索生物技术有限公司提供。
三、方法
１．免疫法 采用胶体金免疫层析原理，Ｈｂ与胶体金标记的单克隆抗体结合后，再与固相抗体结合，形成抗体抗原胶体金标记抗体复合物（双抗体夹心法），在检测区出现红色条带，同时出现红色质控条带为阳性。单独出现质控条带为阴性，不出现质控条带为试剂失效。操作与结果判断均严格按照说明书进行。
２．化学法 在酸及Ｈ２Ｏ２ 作用下，匹拉米洞与Ｈｂ反应，产生紫蓝紫红的颜色。操作与结果判断按照说明书进行。
四、统计学方法
采用ＳＰＳＳ１６．０统计学软件进行分析，２种方法分别检测对照组与胃出血组的胃液标本，结果用Ｐｅａｒｓｏｎχ2检验进行比较，Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。
结 果
一、敏感性与检测范围
将已知Ｈｂ浓度的人抗凝全血用生理盐水稀释成浓度为５０００、２５００、２０００、１０００、５００、１００、１０、１．０、０．０５、０．０１μｇ／ｍＬ的Ｈｂ溶液，混匀，用２种方法进行检测，结果见表１。可见Ｈｂ含量在０．０５～２０００μｇ／ｍＬ之间免疫法均可检出。但Ｈｂ＞２０００μｇ／ｍＬ时，可能出现竞争抑制而呈假阴性。化学法只能检出Ｈｂ含量在１０μｇ／ｍＬ以上的标本。
二、特异性与方法比对试验
胃出血组３０例与对照组４５例胃液标本分别用２种方法检测，结果见表２。２种方法结果差异有统计学意义（χ2＝１１４．４６６，Ｐ＝０．０００）。有文献报道，胃液中消化酶可消化Ｈｂ，使其失去免疫原性，从而使免疫法出现假阴性。为了验证免疫法阴性、化学法阳性的结果是否由胃液消化作用引起，做了以下试验。在２ｍＬ胃液中加入患者本人全血（Ｈｂ１４２ｇ／Ｌ）１００μＬ，放入３７℃水浴箱中，观察不同时间免疫法和化学法的反应结果。见表３。结果显示，胃液消化作用的确可使免疫法出现假阴性。在２ｍＬ胃液中加入患者本人全血１００μＬ，３７℃反应１ｈ，免疫法即为阴性。化学法反应至８ｈ，结果仍呈强阳性（＋＋＋＋）。
讨 论
２种方法潜血试验的敏感性、线性范围和特异性比较，免疫法可检出最低０．０５μｇ／ｍＬ的Ｈｂ，化学法只能检出１０μｇ／ｍＬ以上的Ｈｂ，二者敏感性相差２００倍。Ｈｂ量在０．０５～２０００μｇ／ｍＬ范围内免疫法均可检出。标本中Ｈｂ＞２０００μｇ／ｍＬ时，可因双抗体夹心法竞争抑制现象而呈假阴性。化学法只能检出Ｈｂ含量在１０μｇ／ｍＬ以上样本。免疫法只与人Ｈｂ起反应，不与动物血和其他氧化剂发生假阳性反应。化学法易受氧化剂影响，要求试验前３ｄ禁食动物血、肝，富含叶绿素食物，铁剂和中药，避免假阳性。
由表２可见，免疫法对照组出现１例、化学法出现７例假阳性，经随访得知，６例阳性者在检测前均食入了动物肉类和菠菜。２种方法同时阳性１例是鼻出血者部分血液咽下入胃所致。胃出血组化学法均阳性，免疫法出现２例假阴性，对该２例样本第１次稀释液再稀释１次重新检测，结果阳性，原因是胃液中Ｈｂ过高出现双抗体夹心法的“竞争抑制”现象导致假阴性。因此取标本时量宜少不宜多，以避免假阴性。
胃液可消化Ｈｂ，使其失去免疫原性，导致免疫法出现假阴性结果。由表３可见，当胃液中出血量＜５０μＬ／ｍＬ（相当于Ｈｂ７０００μｇ／ｍＬ）时，免疫法可出现假阴性结果。化学法是Ｈｂ中Ｆｅ３＋具有类过氧化物酶作用，催化Ｈ２Ｏ２ 与色原而显色，不受胃液消化影响，不易出现假阴性。免疫法反应结果还与血液在胃液中停留时间有关。由表３可见，在２ｍＬ胃液中加入１００μＬ患者本人的血液，３７℃反应１ｈ，免疫法为阴性。化学法反应至８ｈ，结果仍呈强阳性（＋＋＋＋）。免疫法与化学法联合应用，可起到优势互补作用。在分析免疫法和化学法结果时，要结合临床症状综合考虑。
目前，免疫胶体金层析法只是定性试验，仅给出阳性或阴性结果，不能对胃出血患者进行疗效观察，很难确定定量反应关系，因此不能指导临床判断出血量。而化学法可根据反应时间和颜色深浅大致估计出血量多少（半定量），适合对临床的正确引导。
免疫法的高敏感性、特异性和检测范围，但又存在Ｈｂ过高出现钩状效应和胃液消化Ｈｂ导致假阴性的现象。虽然化学法敏感性、特异性较差，但可弥补免疫法的缺陷。联合应用免疫法与化学法进行胃液潜血试验，对检测胃出血结果更可靠，可起到优势互补的作用。
总之，联合应用免疫法与化学法进行胃液潜血试验会出现２个结果不一致的情况。如何解释检验结果，需要结合临床体征和其他检查（胃镜、肠镜等）结果综合考虑。如果临床症状高度怀疑出血，但胃液潜血试验结果免疫法阴性、化学法阳性，应考虑免疫法的竞争抑制现象或胃液消化作用所致的假阴性。如果胃镜或其他检查不支持胃出血，化学法阳性时，应考虑其他氧化剂导致的假阳性。出现免疫法与化学法结果不一致时，应及时与临床沟通，指导临床正确解读检验结果，避免临床医师对检验结果的误会，从而对患者做出正确的诊断。
编辑：范伟伟
