武汉大学人民医院检验科 刘艳红，李艳，何颖，万奖
摘要：目的 探讨静脉全血标本的存放时间对网织红细胞（ＲＥＴ）检测结果的影响。方法 用ＳｙｓｍｅｘＸＥ-２１００血液分析仪对贫血及非贫血患者静脉全血标本分别于采血后不同时间点连续检测，观察ＲＥＴ检测各项指标的变化。结果 非贫血患者网织红细胞计数（ＲＥＴ＃）及ＲＥＴ％的结果从采血后直至７２ｈ差异均无统计学意义，而未成熟网织红细胞比率（ＩＲＦ％）、高荧光强度网织红细胞（ＨＦＲ％）、中荧光强度网织红细胞（ＭＦＲ％）及低荧光强度网织红细胞（ＬＦＲ％）的结果在７２ｈ时才出现明显变化；贫血患者ＲＥＴ＃及ＲＥＴ％的检测结果在７２ｈ时出现明显降低（Ｐ＜０．０５），而ＩＲＦ％、ＨＦＲ％、ＭＦＲ％及ＬＦＲ％的结果从２４ｈ开始即出现明显变化。结论 静脉全血采集后放置时间过长将影响ＲＥＴ检测结果的准确性，贫血患者应在采血后２４ｈ以内检测，方能较好反映结果的准确性。
关键词：网织红细胞检测；静脉全血；存放时间
血液分析仪因其方便、快速、准确已被广泛应用，静脉全血样本的存放时间对血液分析结果的影响已有较多报道，但大多探讨的是对血液分析常规项目结果的影响，而对网织红细胞（ＲＥＴ）测定的影响少有报道。因ＲＥＴ测定项目非部分医院每日必查常规项目，可能会集中几天的标本统一测定。但标本放置时间是否会影响ＲＥＴ检测结果的准确性，且贫血与非贫血患者标本是否有存在差异，我们采集了２０例门诊非贫血患者和３０例住院部贫血患者血常规标本于不同时间节点做了比较实验。
材料和方法
一、研究对象
随机选取武汉大学人民医院２０１０年５月至７月门诊非贫血患者２０例及住院贫血患者３０例，其中营养性贫血９例，溶血性贫血４例，骨髓增殖性疾病７例，慢性病（高血压、恶性肿瘤、慢性炎症等）贫血１０例。
二、仪器和试剂
日本Ｓｙｓｍｅｘ公司ＸＥ-２１００全自动血液分析仪；进口专用配套试剂、质控液及校准液。
三、方法
１．ＸＥ-２１００ＲＥＴ参数精密度评价 血液分析仪检测静脉全血之前进行全面保养，并进行重新校准，ＲＥＴ的校正按照厂家维修手册指定的方法进行，再采用配套质控品ＣＨＥＣＫ 分别评价ＲＥＴ参数的批内精密度和天间精密度，结果均达到厂家规定要求。
２．正规采集门诊患者静脉血２ｍＬ，颠倒５～８次充分混匀。共收集２０例标本，标本中红细胞相关参数均为正常。立即在ＸＥ-２１００全自动血液分析仪上进行ＲＥＴ测定，并分别于采血后２、４、８、２４、４８及７２ｈ再重复进行ＲＥＴ检测，并记录ＲＥＴ各参数及白细胞计数的结果。
３．收集住院贫血患者标本３０例，于采血后２ｈ检测ＲＥＴ，然后分别于采血后８、２４、４８及７２ｈ再重复进行ＲＥＴ检测，并记录ＲＥＴ各参数及ＷＢＣ计数的结果。
４．门诊及住院贫血患者标本均于每次检测后存放于４℃冰箱保存，每次检测前从冰箱中取出标本在室温下放置１５ｍｉｎ，恢复至室温后再进行检测。
四、统计学方法
采用ＳＰＳＳ１３.０统计学软件进行统计分析，计数资料以
±ｓ表示，２组间的差异性比较采用两相关样本的非参数检验。
结 果
将２０例门诊非贫血患者采血后于即时、２、４、８、２４、４８及７２ｈ分别进行ＲＥＴ检测，结果显示：采血后２、４、８、２４、４８及７２ｈ分别与即时检测结果相比较，ＲＥＴ计数（ＲＥＴ＃）及ＲＥＴ％的结果差异无统计学意义（Ｐ＞０.０５）；其他参数未成熟ＲＥＴ比率（ＩＲＦ％）、高荧光强度ＲＥＴ（ＨＦＲ％）、中荧光强度ＲＥＴ（ＭＦＲ％）及低荧光强度ＲＥＴ（ＬＦＲ％）的结果在４８ｈ及以前各时间点亦差异无统计学意义（Ｐ＞０.０５），而在７２ｈ时检测结果出现明显变化，具体表现为ＨＦＲ％、ＭＦＲ％和ＩＲＦ％呈极明显增高（Ｐ＜０.０１），而ＬＦＲ％呈极明显降低（Ｐ＜０.０１），见表１。
将３０例住院贫血患者采血后于２、８、２４、４８及７２ｈ分别进行ＲＥＴ检测，结果显示：采血后８、２４及４８ｈ分别与２ｈ时检测结果进行比较，ＲＥＴ＃及ＲＥＴ％的检测结果差异无统计学意义（Ｐ＞０.０５），仅在７２ｈ时出现明显降低（Ｐ＜０.０５）；其他参数ＩＲＦ％、ＨＦＲ％、ＭＦＲ％及ＬＦＲ％的结果从２４ｈ开始即出现明显变化，具体表现为ＩＲＦ％和ＭＦＲ％呈极明显增高（Ｐ＜０．０１），ＨＦＲ％呈明显增高（Ｐ＜０．０５），而ＬＦＲ％呈极明显降低（Ｐ＜０.０１），见表２。
比较２０例门诊非贫血患者采血后于７２ｈ与即时的白细胞计数差异，另将３０例住院贫血患者采血后于２４ｈ及７２ｈ分别与２ｈ进行白细胞计数差异的比较，结果显示：２组之间差异无统计学意义（Ｐ＞０.０５），见表３。
讨 论
高端血液分析仪检测速度快、精密度高，且可进行ＲＥＴ多项参数的检测。ＲＥＴ是晚幼红细胞脱核后发育为成熟ＲＢＣ过程中胞浆中含有残留ＲＮＡ的ＲＢＣ，ＳｙｓｍｅｘＸＥ-２１００全自动血液分析仪根据ＲＥＴＲＮＡ含量的不同用荧光染料使其着色，用流式细胞术将ＲＥＴ分成ＨＦＲ、ＭＦＲ和ＬＦＲ，荧光强度越高，ＲＥＴ越幼稚。ＩＲＦ是指含高ＲＮＡ的ＲＥＴ与总ＲＥＴ的比值，是评价红系增生活跃有用的指标，各参数间的关系是：ＩＲＦ％ ＝ＨＦＲ％ ＋ＭＦＲ％。然而由于ＲＥＴ测定非常规项目，标本量较少，有些医院可能会集中几天的标本一起进行测定。为明确标本放置时间过长进行ＲＥＴ检测是否会影响结果的准确性，本实验比较了贫血及非贫血患者采血后不同时间点ＲＥＴ检测结果的差异。
我们认为，采血后立即进行检测（如床边检测）结果应为准确值，此时血液成分尚来不及与抗凝剂发生充分作用，产生形态变化及假性凝集等情况从而影响检测结果。本组研究结果显示，非贫血患者采血后即刻直至７２ｈ为止，ＲＥＴ＃及ＲＥＴ％检测结果均无明显改变（Ｐ＞０.０５）；而ＩＲＦ％、ＨＦＲ％、ＭＦＲ％及ＬＦＲ％的结果至７２ｈ时检测结果才出现明显变化（详见表１）。与此结果略有不同的是，贫血患者ＲＥＴ＃及ＲＥＴ％至７２ｈ时检测结果开始出现明显降低（Ｐ＜０.０５）；而ＩＲＦ％、ＨＦＲ％、ＭＦＲ％及ＬＦＲ％的结果从２４ｈ开始即出现明显变化（详见表２）。该结果与国内张春平等报道的“ＲＥＴ、ＩＲＦ、ＬＦＲ在３ｄ的保存时间内虽有轻微的变化趋势，但与初次检测值比较均未发生明显改变”的结论并不完全一致，这可能是由于所选病例组成不同的原因。
虽然贫血与非贫血患者ＲＥＴ各指标发生变化出现的时间有所不同，但变化的趋势是一致的，均表现为ＩＲＦ％、ＨＦＲ％和ＭＦＲ％呈明显增高（Ｐ＜０.０５），ＬＦＲ％呈明显降低（Ｐ＜０.０５）。推测此现象产生的原因可能是由于ＲＥＴ离体后会在体外继续发育成熟，首先表现为较成熟的网织红细胞（ＬＦＲ）先转变为成熟ＲＢＣ，ＬＦＲ的减少导致ＨＦＲ和ＭＦＲ的相对比例增加，而ＲＥＴ总量会逐渐减少。贫血患者标本各指标出现明显变化较非贫血患者早，可能是由于贫血患者ＲＥＴ体外发育所需时间较正常人短所致。当然，贫血的严重程度不同时由于ＲＥＴ含量不同也可能对标本放置时间的反应有不同影响，还有待进一步探讨。另外，通过比较２组患者在不同时间点白细胞计数的差异，结果显示差异无统计学意义（见表３），因此，可以排除ＷＢＣ降解碎片混入ＲＥＴ检测区域致使核酸含量增高所带来的干扰影响。
一般来说，临床上有检测ＲＥＴ相关参数需求的患者多数为ＲＢＣ系统生成障碍患者，即贫血患者。因此，原则上对于凡是需要进行ＲＥＴ检测患者的标本，应最好在２４ｈ以内检测方能较好地反映结果的准确性。
编辑：范伟伟
