林高贵1， 陈筱菲2， 陈以勒1， 曾云祥1
1．温州市第八人民医院；2．温州医学院附属第一医院
摘要：目的 探讨实现自建检测系统与标准检测系统检验结果可比性的方法。方法 以日立7600生化分析仪、罗氏试剂及测定程序、cfas校准品及罗氏质控品为标准检测系统，通过患者新鲜混合血清量值传递，将自建检测系统的cfas校准品的标示值转换为校正自建检测系统“雅培C8000生化分析仪/上海科华试剂及测定程序”的实际校正值。同时，参照美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)EP-9A文件，用患者新鲜血清分别对cfas校准品量值传递前、后的自建检测系统与标准检测系统作7项常见血清酶[丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、γ-谷氨酰基转移酶(GGT)、肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、淀粉酶(AMY)]的比对试验，并对测定结果进行统计分析和偏倚评估，以系统间偏倚小于美国临床实验室修正法案(CLIA’88)允许误差的1/4作为校正是否成功、系统间偏差临床是否可接受的标准。结果 量值传递前各项目在2种检测系统上的相关系数(r)≥0.975，ALT、GGT在2种检测系统上的相对偏差(SE％)>1/4 CLIA’88，临床不能接受；量值传递后各项目在2种检测系统上检测结果经线性回归分析，其r 和线性方程斜率(a)、截距(b)均有不同程度的改善，所有项目的SE％≤1/4 CLIA’88，临床全部可接受。结论 经量值传递后的患者定值血清可用来校正自建检测系统，可以提高自建检测系统检测结果的量值溯源性，从而实现自建检测系统与标准检测系统检验结果的可比性。
关键词：量值溯源；参考方法；检测系统；比对研究；偏倚评估
国际上特别强调使用固定组合的检测系统(即分析仪器、校准品、试剂和检验程序等形成固定组合)，即标准检测系统。使用这样的检测系统对患者样本进行检验，其检验结果可溯源至参考方法，具有溯源性和可比性。所以面对国内实验室大量使用的自建检测系统(即实验室根据自己意愿选择仪器、校准品、试剂等而建立的检测系统)，如何实现其检验结果的溯源性和可比性是一个极大的现实问题。为了实现本科室使用的自建检测系统(雅培C8000生化分析仪/上海科华试剂)与标准检测系统间检验结果的可比性，我们根据美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)EP-9A文件《用患者样本进行方法学对比及偏差评估EP-9A指南文件》，利用量值传递的原理，分别于量值传递校正前后在自建检测系统和标准检测系统上作一系列的检验结果比对。
材料和方法
一、检测系统
1．标准检测系统 由日立7600生化分析仪(简称日立7600)、罗氏试剂及测定程序、cfas校准品及罗氏质控品组成。因其是国际公认配套的标准系统，具有量值溯源性，其检测值可溯源至参考方法，且参加卫生部、省、市室间质控成绩优秀，室内质控日间变异系数(CV)均小于美国临床实验室修正法案(CLIA’88)室间评估允许误差的1/3，故将其作为目标检测系统(以下简称目标系统)。
2．自建检测系统 雅培C8000生化分析仪(简称雅培C8000)、上海科华试剂及测定程序、cfas校准品及罗氏质控品(以下简称自建系统)。
二、样本
浓度选择按照EP-9A文件中方法比对实验数据分布建议表的要求，并尽可能覆盖方法学检测线性范围，每次比对试验于不连续的5 d、每天收集8份新鲜患者血清样本，共40份样本，并把每份样本平均分为2份(分别于两检测系统上检测)；另外取多份肉眼观察无黄疸、溶血、脂浊的患者新鲜血清混成一混合血清待用。
三、检测方法
1．准备工作 2台仪器各经常规维护、保养，并用各自校准品校准。2种检测系统质控在控时方可进行以下实验。
2．量值传递前比对试验 各项目均采用连续监测法，均严格按厂商试剂盒的说明书进行，在不连续的5个工作日，每天选用8份新鲜患者血清分别用日立7600、雅培C8000，测定顺序为1→8、8→1，得40份数据，各检测系统在收到样本2 h内完成检测。
3．临时校准品制备 目标系统作常规维护、保养，再用cfas校准品对各项目校准，然后把cfas当作样本检测，不断适当调整K值，直至测得值等于cfas标定值，然后多次(5次)重复测定一新鲜混合血清，取均值，并将其作为具有量值传递载体值的自建系统临时校准血清。
4．自建系统的校正 用上述所得的临时校准血清对自建检测系统校准，再把自建系统的校准物cfas当作患者样本在雅培C8000上对7项血清酶[丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、淀粉酶(AMY)、γ-谷氨酰基转移酶(GGT)、碱性磷酸酶(ALP)]平行测定5次，取均值作为cfas在雅培C8000上的实际校正值，用此值重新校准雅培C8000。
5．量值传递后比对试验 量值传递校正后再次在2种检测系统上就40份患者新鲜血清对各项目进行上述比对试验，记录结果。
四、数据处理
1．离群值检查 不采用已明确有人为误差的结果。按EP-9A文件进行方法内及方法间离群值检查，以4倍的平均差值为判断限，所有差值都不应超出限值。如果超出则为离群点，只有一个离群点可删除，一个以上则查明原因，并重新检测补充数据。
2．目标系统(X)测定范围的检验 将40份数据输入Windows Excel 软件对不同检测系统各项目测定结果进行相关回归分析，并得出回归方程Y=aX+b和相关系数(r)，根据NCCLS EP-9A文件，如果r≥0.975则说明石范围合适，直线回归统计的斜率(a)和截距(b)可靠，可以用其估计自建系统的系统误差，并以医学决定水平处的系统误差来判断自建系统量值溯源性如何，临床是否可接受；如r<0.975，则使用部分个别差异法计算平均偏差。
3．方法间系统误差的计算及评价 利用线性回归方程，以各项目医学决定水平处的浓度(Xc)代入回归方程求Yc，则Y与X的系统误差(SE)=l Yc—Xc l ，相对偏差(SE％)=l Yc—Xc l / Xc×100％。以CLIA’88室间评估允许误差(Ea)的1/4作为判断结果可接受的依据，即SE％≤1/4CLIA’88时说明白建系统与标准检测系统间检测结果具可比性，自建系统具较好的量值溯源性，临床可接受。
结果
一、进行方法内及方法间检查均未发现有离群值。
二、量值传递前自建系统与目标系统测定结果的相关与回归分析见表1。以目标系统为X，自建系统为Y进行相关和回归分析，并且在不同医学决定水平处进行偏倚评估和临床可接受性能评价。
三、经目标系统重复测定的混合血清各项目定值分别为ALT：101 U/L、AST：86 U/L、ALP：175 U/L、GGT：88 U/L、CK：219 U/L、LDH：240 U/L、AMY：142 U/L。用此混合血清作为临时校准物校准自建系统，然后把自建系统的cfas校准品作为样本多次测定，其标示值与测定值比较见表2。用测定值再次校正自建系统，然后再次在两检测系统上就40份患者新鲜血清对各项目进行比对试验，其回归分析及偏倚评估、临床可接受性见表3。
讨论
检测系统是指完成一个检验项目所涉及的仪器、试剂、校准品、检验程序、保养计划等的组合。国际上特别强调使用固定组合的检测系统(即分析仪器、校准品、试剂和检验程序等形成固定组合)，即标准检测系统，使用这样的检测系统对患者样本进行检验，其检验结果可溯源至参考方法，具有溯源性和可比性。即在实际工作中，实验室使用固定组合的标准检测系统进行检验，其检验结果具有可溯源性，而改变分析系统中的任一因素，其检验结果的可溯源性将被打断。面对国内实验室大量使用的自建系统(即实验室根据自己意愿选择仪器、校准品、试剂等而建立的检测系统)，如何实现其检验结果的可溯源性和可比性是一个极大的现实问题。
实验室的认可准则ISO/FDIS 15189“医学实验室质量和能力的专用要求”也对临床检验结果的溯源性作出明确要求。量值溯源是指自下而上通过不间断的校准而构成的溯源体系，使测量结果能够与有关的测量标准，通常是国际或国家测量标准联系起来韵特性。本研究参照NCCLS EP-9A文件，首先在自建检测系统和标准检测系统上进行量值传递前的比对试验，由表1可知量值传递前自建系统与标准系统的相关性良好，所有项目的r 均>0.975，这表明目标系统样本取值范围合适，可以用相应的直线回归方程评估两检测系统间的系统误差，ALT、GGT在不同医学决定水平处的SE％>1/4 CLIA’88，临床不能接受；而AST、ALP、CK、LDH、AMY在不同医学决定水平处的SE％≤1/4 CLIA’88，临床全部可以接受。从这里可以看出：同一样本在不同检测系统上结果存在差异，甚至部分项目临床不能接受，说明保证检测系统的完整是实现检测结果可溯源性的必要条件，而组成检测系统的任何元素的改变都会引起测定结果的差异。
临床检验量值溯源均需最后验证其有效性。验证方法是用参考测量过程和常规测量过程同时分析足够数量的、有代表性的、分别取自不同个体的实际新鲜样本。本研究用患者新鲜混合血清作为量值传递载体，对cfas校准品进行量值传递，确定cfas校准品在自建系统上的实际校正值。由表2可知，cfas校准品用于校正自建系统时，其标示值与实际校正值有较大差异，相对偏倚超过5％的有ALT、GGT、CK、AMY。说明校准品在不同检测系统发生的效应值也不一样，校准品是专用于某一检测系统并由其赋予校准值的。量值传递后对比分析40份患者新鲜血清。由表3可以看出两检测系统检验结果的线性方程a、b和r值都有不同程度的改善，系统间的偏差也缩小。经评估两检测系统间检验结果的偏差临床全部可接受。根据国际标准化实验室要求，检验结果只有直接或间接地溯源到参考方法，才能保证检验结果的准确性和不同实验室检测结果的可比性。在本研究中，因为目标系统是可溯源到参考方法的标准检测系统，所以实现了自建系统的结果也可溯源到参考方法。
综上所述，量值传递是量值溯源的基础，量值溯源是提高检验质量的重要手段，经量值传递后的患者定值血清可用来校正自建系统，从而提高自建系统检测结果的准确性和量值溯源性，进而实现自建系统与标准检测系统检验结果的可比。
编辑：范伟伟
