解放军第252医院 周建光 杨梅
摘要：肿瘤标志物的检测在恶性肿瘤诊断中具有重要的参考价值。蛋白芯片是近年来伴随着基因芯片迅速发展起来的一项新技术。它是一种自动快捷、高灵敏度、高通量的研究方法，已成功地运用于肿瘤标志物的检测。多肿瘤标志物蛋白芯片检测技术解决了以往检测方法每次只能分析单项指标、费用昂贵、需要的血清量较大等缺点，在临床有较为广泛的应用前景。
关键词：多肿瘤标志物；蛋白芯片；肿瘤
近年来，蛋白组学及芯片技术在肿瘤临床研究中已取得引人瞩目的进展。多肿瘤标志物蛋白芯片诊断技术因其具有快速、高效、高通量的特点，已逐渐受到重视，并被广泛应用于临床。
早期诊断与早期治疗是防治肿瘤与降低死亡率的最有效方法。随着肿瘤细胞的发生，肿瘤患者体内某些蛋白质会发生变化，或产生新的与肿瘤关联的异常蛋白，通过对这些异常的蛋白质的检测不仅可以了解疾病的进展，也有可能寻找与肿瘤发生及转移相关的新的蛋白质、肿瘤特异性的标志物及肿瘤药物治疗的靶标，对肿瘤的诊治将起到重要作用。蛋白质芯片检测技术在分析蛋白质组研究中不仅具有快速、高效、高通量的特点，而且能鉴定蛋白质间的相互作用，已逐渐被应用于临床。多肿瘤标志物蛋白芯片联合检测，可检测多种肿瘤标志物，所用标本量少，且可同时完成十多种实体肿瘤、多个肿瘤标志物检测。大量研究表明多肿瘤标志物蛋白质检测可以提高对肿瘤诊断的敏感性和特异性，具有重大的意义。
1 蛋白芯片技术的基本原理
蛋白质芯片又名蛋白质阵列或蛋白质微阵列，主要是指通过微加工和微电子技术把成千上万种探针蛋白高密度排列在固相支持物表面，通过探针蛋白特异性地捕获样品中的靶蛋白，洗去未结合的其它蛋白后，运用相应检测系统对靶蛋白进行定性、定量分析，以实现对细胞、蛋白质、DNA以及其它生物组分的准确、快速、大信息量的检测，研究不同时期、不同条件下细胞内蛋白质的变化，具有重要价值。蛋白质芯片选用抗体、抗原、受体、酶作为探针蛋白，探针蛋白可事先合成或经纯化制备，也可在芯片上直接合成。
2 多肿瘤标志物蛋白芯片检测在肿瘤诊断中的作用
2.1 在肺癌诊断中的应用 肺癌的发病率呈逐年上升趋势，在恶性肿瘤中占重要地位。早期肺癌与肺部感染常有相似症状，中晚期肺癌中相当一部分患者因各种原因而无法得到明确诊断。血清肿瘤标志物的检测对肺癌诊断、治疗、愈后判断及病情进展的具有重要的意义[1]。姚敏等[2]用多肿瘤标志物蛋白芯片对138例肺癌患者、73例良性肺病患者和196例健康体检者血清中的12种常见肿瘤标志物的水平进行检测，结果显示：肺癌组肿瘤标志物检测阳性率显著高于良性肺病组和健康体(P<0.001)；肿瘤标志物的敏感性随肿瘤TNM分期的增加而增高，CEA、CA125对Ⅳ期高敏感，均有显著性差异(P<0.01)；NSE阳性率以小细胞肺癌组最高(P<0.001)；CEA阳性率以腺癌组最高(P<0.05)；联合检测对肺癌的阳性率均显著高于单一标志物检测(P<0.01)。高媛，秦军等[3]用多肿瘤标志物蛋白芯片检测78例肺癌患者血清的肿瘤标志物，结果显示：多肿瘤标志物蛋白芯片检测方法对肺癌诊断的阳性率较高，当3项以上同时阳性时特异度可高达96.8%。说明多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统可以显著提高肺癌诊断的敏感性和特异性，对于初步判断病灶的恶性性质有一定的帮助，适合无明显症状的门诊患者和肺癌高危人群的筛查。
2.2 在肝癌诊断中的应用 肝癌是临床上最常见的恶性肿瘤之一，而肝癌的早期诊断和早期治疗是提高疗效的最有效的手段。如何提高肝癌的早期诊断水平，直是肝癌研究工作的重点。目前所发现的肿瘤标志物的检测在肝癌诊断中具有一定的价值，但单一标志物检测始终存在着敏感性、特异性不足之处，特别是对肝癌的早期检出率不高，因此，为了弥补单指标检测的不足，提高肺癌的诊断敏感性，临床上常先对现有的肿瘤标志物进行联合检测。大量研究表明[4~5]，多肿瘤标志物蛋白芯片联合检测肝癌，可以为临床诊断提供更多的指标，提高辅助诊断的准确性，弥补单一肿瘤标志物特异性不强和敏感性较低的不足，有效地筛选出肿瘤高危人群，对原发性肝癌的早期发现、早期诊断具有重要意义。张曙，张先瑞等[6]用多肿瘤标志物蛋白芯片对93例原发性肝癌患者，78例良性肝病患者和85例健康体检者血清中的12种肿瘤标志物的水平进行检测，结果发现原发性肝癌患者血清CA199、CEA、CA242、AFP、CA125和CA153这6项显著高于健康对照组和良性肝病组(P<0.05)。同时6项肿瘤标志物单独检测时，AFP的AUC最大(P<0.05)；而6项肿瘤标志物联合检测的AUC要大于各项肿瘤标志物单项检测结(P<0.05)。说明应用多肿瘤标志物蛋白芯片对CA199、CEA、CA242、AFP、CA125和CA153这6项的联合检测是筛检原发性肝癌的优化组合，对原发性肝癌的早期诊断有较高临床应用价值。
2.3 在胃癌诊断中的应用 根据世界卫生组织报道，2002年中国胃癌人数占到全世界的42%以上，其死亡率一直居高不下，处于第二位，仅次于肺癌[7]，胃癌严重威胁中国人的健康及生命，并造成社会资源的巨大浪费。文正伟，法逸华等[8]用多肿瘤标志物蛋白芯片测定43例胃癌患者血清中12种常见肿瘤标志物，并与良性病变患者和正常人血清中肿瘤标志物水平进行比较。结果显示：12项指标中CA199、CEA、CA242、CA125、AFP、NSE等6项指标胃癌组明显高于正常对照组和良性组，差异有统计学意义(P<0.05或<0.01)。胃癌患者血CA199、CEA、CA242、CA125、AFP、NSE等6项联合检测阳性率为88.4%，明显较单项检测阳性率高，差异有统计学意义(P<0.05)。表明CA199、CEA、CA242、CA125、AFP、NSE作为胃癌的诊断指标，对胃癌的检测具有较重要的临床应用价值。张金华，倪居等[9]通过多肿瘤标志物蛋白芯片对溃疡型胃癌和胃溃疡患者血清肿瘤标志物的检测中发现CA19-9，CEA，CA242，CA125在溃疡型胃癌组血清中的水平明显高于胃溃疡组(P<0.05)，与有关报道相符。说明多肿瘤标志物蛋白芯片在溃疡型胃癌鉴别诊断中断具有一定的应用价值，并且联合检测提高阳性率，弥补单项检测的不足，提高肿瘤的检出率。
2.4 在其它肿瘤诊断中的应用 研究表明[10~11]，应用多肿瘤标志物蛋白芯片对卵巢癌患者血清肿瘤标志物CA19-9、CA125、CEA、AFP、f-PSA联合检测可提高卵巢癌的诊断效率，对其早期诊断有一定价值。戴楠，王东等[12]对泌尿系肿瘤患者及男性生殖系肿瘤患者的血清肿瘤标志物检测中发现，除前列腺癌外，用多肿瘤标志物蛋白质芯片检测泌尿系和男性生殖系肿瘤可提高诊断的灵敏度，优于单项肿瘤标志物；诊断判别函数可明显提高泌尿系及男性生殖系肿瘤诊断的准确率，具有一定的临床参考价值。蒋志军，周维新等[13]对肠道肿瘤患者血清肿瘤标志物的检测中，发现多肿瘤蛋白芯片诊断系统的应用，对肠道肿瘤患者的良恶性的判断有一定临床应用价值，对术后复发转移的判断也有一定的应用价值。
综上所述，肿瘤是威胁人类生命健康的主要因素之一，也是死亡率最高的疾病之一。目前的诊断方法检测范围多为中晚期患者，不利于肿瘤患者的早期诊断和治疗，且由于肿瘤发生的隐匿性及发展的侵袭性，多数患者在确认时已有远处转移，因此早发现、早诊断、早治疗是提高肿瘤患者生存率和治愈率的关键。多肿瘤标志物蛋白芯片诊断技术因具有快速、高效、高通量的特点，逐渐受到重要，并广泛应用于临床，并随着不断改进和发展而发挥越来越大的作用。利用蛋白质组学理论和技术进一步寻找肿瘤具有高度特异的新的肿瘤标志物及其最佳联合指标也必将成为今后肿瘤标志物研究的新策略和新方向之一。
参考文献
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编辑：范伟伟
